众所周知，骨质疏松症（OP）是一种以骨量减少、骨的微观结构退化和骨折危险系数增高为特征的系统性骨代谢疾病，已日益成为威胁中老年人生活质量的常见病。斑马鱼作为一种小型脊椎类模式生物，由于其具有胚胎透明、骨骼发育迅速、与人类高达87%的基因同源性等特点，而被广泛应用于骨骼发育及相关疾病研究。目前已有研究表明，淫羊藿对骨代谢、免疫系统、抗肿瘤等均有作用。炙淫羊藿即用羊油炒过的淫羊藿，其抗骨质疏松活性受到广泛关注。

11月1日，由广东省检测检验学会提出并归口，广东省中药研究所、广东省人民医院、深圳大学、广州环特、广东金骏康生物科技有限公司等科研院所、企业联合起草的团体标准——《炙淫羊藿抗骨质疏松活性的测定 斑马鱼法》（标准编号：T/GSTI 0006—2024）正式发布，并将于12月1日起正式实施。

这是全国首个基于斑马鱼测定炙淫羊藿抗骨质疏松活性的标准。该标准规定了炙淫羊藿抗骨质疏松活性的斑马鱼测定方法，斑马鱼检测标准的制定和实施为中药高通量动物模型的抗骨质疏松方法的建立、骨质疏松病理机制的研究，提供了参考和依据，填补该领域检测标准的空白，将对中药筛选及创新型研究起到引领、支撑、规范作用，对促进中医药行业高质量发展有着重要的意义。

01、标准技术评审会

9月5日，广东省检验检测学会组织召开了2024年团体标准技术评审会，对《炙淫羊藿抗骨质疏松活性的测定 斑马鱼法》等团体标准进行技术审查。

会议由广东省检验检测学会副会长胡文军主持，项目专家组由广东省科学院生物与医学工程研究所副所长余构彬、广东省粤科标准化科学研究有限公司标准化副所长吴巧、广州市药品检验所中药室副主任栗建明等5人组成，余构彬任专家组组长，学会专职副秘书长洪建军参加会议。

会上，专家组听取了标准起草过程和技术要点等汇报，并对标准文本进行了逐条逐款审查、对每项内容和相关资料等方面进行了质询和讨论，提出了修改补充意见和建议。专家组讨论决定，一致同意团体标准《炙淫羊藿抗骨质疏松活性的测定 斑马鱼法》修改后通过技术审查。

此次省学会组织评审通过的斑马鱼检测标准的制定和实施为中药高通量动物模型的抗骨质疏松方法的建立提供了参考和依据，填补该领域检测标准的空白。

02、标准介绍

该标准经广东省检验检测学会专家会评审通过，规定了炙淫羊藿抗骨质疏松活性的斑马鱼测定方法，共分为范围、规范性引用文件、术语和定义、实验动物、结果计算、实验有效性等9个部分，适用于小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens Maxim.、朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai干燥叶的羊脂油炮制品的抗骨质疏松活性的测定等。

该标准规定了炙淫羊藿抗骨质疏松活性的斑马鱼测试方法为：将4dpf斑马鱼置于24孔板中，分别给予相应溶液1mL，于28±1℃的培养箱中培养孵育，每24h换相应溶液50%，直至孵育至9dpf；其染色方法为：吸净孔板中的溶液，用标准稀释液润洗2遍，加入1mL现配的0.2 %钙黄绿素工作液，避光染色45min。染色后用标准稀释液润洗，直至溶液颜色透明。

将仔鱼侧身摆放，用甲基纤维素固定，置于荧光显微镜下对斑马鱼脊椎进行观察并拍照。统计各组斑马鱼的染色脊椎节个数，定量分析第1～3节脊椎椎体（如图1）的荧光强度（A），统计学处理结果以均值（mean）±标准差（SE）表示；采用单因素方差分析，p＜0.05表明具有统计学差异。

骨质疏松改善率（%）按（1）计算，计算公式如下：

式中：B ——骨质疏松改善率，单位%；Ai ——供试品组或阳性对照组的荧光强度，单位AU；A1 ——模型对照组的荧光强度，单位AU；A0 ——空白对照组的荧光强度，单位AU。

标准还规定了实验有效性的判断、测试要求及结果解读等。各测试组暴露完成后，存活率至少为90%，否则测试结果无效。每批次测试的阳性对照组的脊椎节个数和荧光强度与模型对照组相比（p＜0.05），且阳性对照组斑马鱼的骨质疏松改善率为正数。供试品组斑马鱼脊椎节个数和荧光强度与模型对照组相比（p＜0.05），且骨质疏松改善率为正数的情况下，实验结果可作为供试品具有抗骨质疏松活性的依据。

未来，环特生物作为健康美丽产业CRO服务领军企业、斑马鱼技术应用领导者，将依托“斑马鱼+类器官+哺乳动物+人体临床”多维生物技术服务平台，联合更多的合作伙伴，持续推进斑马鱼技术创新与应用，以标准化引领行业升级，助力中医药产业高质量发展！