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转染试剂特点及常见问题

作者:北京百奥创新科技有限公司 2022-11-16T17:11 (访问量:7497)

一、PEI线性转染试剂

PEI又称为线性化聚乙烯亚胺,是人工合成的含有极高密度正电荷的有机大分子阳离子聚合物。PEIDNA通过正负电荷的相互吸引形成复合物,是较为有效的聚阳离子型基因载体,转染效率高PEI转染试剂可以方便地进行化学修饰,并且不会像脂质体一样破坏细胞结构,所以相对毒性较低。


二、PEI Max转染试剂(24765-1)特点

·转染效率高,细胞毒性低;

·蛋白表达量高;

·节约成本:PEI至少能够降低40%的转染试剂总成本;

·适用于HEK293等真核细胞的转染;

·适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染;

·适用于有血清和无血清的转染条件;

·无机试剂,无动物源成分;

·产品稳定,质控严格;

·工艺流程适用范围广,容易优化,适合小规模培养板、培养瓶到大规模的生物反应器。

三、PEI转染试剂性能


1 转染PEI后的抗体表达

500mL HEK293细胞(ACE)CHO细胞(BDF)细胞培养物转染LPEIPEI MaxPEI proTM。采用蛋白-A HPLC法检测单克隆抗体曲妥珠单抗(AB)Palivizumab单抗(CD)B72-3(EF)的滴度,与LPEI(PEI 25K)相比,当使用PEI MaxPEI proTM时,三种抗体的表达量都较高,但使用PEI Max试剂转染能使所有抗体都有最高表达。由此可见,PEI Max转染试剂(MW 40000)具有更高的转染效率。

四、转染中的常见问题

1.转染效率低

原因:(1)细胞活力:使用活力好传代小于15代的细胞。

(2)细胞接种密度高/低:适当降低/增加接种密度。

(3)PEI/DNA比率不合适:进行不同基因转染时应对PEIDNA的比例进行优化,以达到最适比例。

(4)质粒片段较大:可根据实际实验需要调整,如适当增加转染质粒总量等。

(5)混合方式不当:质粒DNAPEI溶液混合时避免涡旋。同时要注意PEI加入 DNA溶液中的顺序。

2.细胞毒性高

原因:(1)转染液孵育时间过长:过长时间 PEI/DNA 复合体会导致细胞毒性。

(2)细胞接种密度低:适当增加接种密度。

(3)PEI/DNA比例高:优化合适的PEIDNA的比例。

北京百奥创新科技有限公司提供多种PEI线性转染试剂,具体信息请咨询百奥创新客服。


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