北京索莱宝科技有限公司  张净花  13426459985
线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒

    

        

            

            

            

            
差速离心法   50 管/48 样

            
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
            
测定意义
            
线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，
            
为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离
            
保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
            
原理
            
利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门
            
试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。
            
需自备的仪器和用品
            
超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
            
试剂的组成和配制

            
            
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
            
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
            
试剂三：10mL×1 瓶，-20℃保存；
            试剂四：1mL×1 支，-20℃保存；

            
            
提取步骤
            
1、 准确称取约0.1g 组织或收集约500 万细胞，加入1mL 试剂一和10uL 试剂四，用冰浴
            
匀浆器或研钵研磨。
            
2、 4 ℃ 600 g 离心5min。
            
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心10min。
            
4、 上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。
            
5、 沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体
            
的生理功能等方面的研究。
            
6、 在沉淀中加入200uL 试剂二和2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，
            
超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），可用于线粒体酶活性测定。
            
7、 在沉淀中加入200uL 试剂三和2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，
            超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。 

            
            
注意事项
            
1、 分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或
            
4℃预冷。
            
2、 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g 和11,000g，如果希望纯度更高，但对
            
线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g 和3500g。
            3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。