蛋白质分子量的测定是研究蛋白质性质、结构和功能的关键步骤。通过准确测定分子量，可以推断蛋白质的组成、结构状态以及可能的修饰或复合形式。这一过程在基础生物学研究和生物制药开发中具有重要作用，能够为蛋白质功能解析和工艺优化提供必要的数据支持。

一、核心原理与测定基础

蛋白质分子量的测定依赖于样品的分子特性及其在特定分析条件下的行为。分子量测定的核心原理通常基于两类方法：一类是通过分子分离技术推算分子量，另一类是利用直接测量的方法精确确定分子量。

1.分离技术：

例如凝胶过滤色谱（GFC）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），通过样品在分离介质中的迁移行为估算分子量。样品的迁移速度与其分子尺寸和形状相关。

2.直接测量方法：

质谱分析（MS）被广泛用于蛋白质分子量的精确测定。这类方法通过离子化和质量分析过程直接提供分子量信息，无需依赖标准曲线或间接计算。

二、常用方法与技术步骤

1. 凝胶过滤色谱（GFC）

GFC是一种经典的蛋白质分子量的测定方法，基于蛋白质分子在多孔凝胶填料中的分离行为。步骤包括：

（1）样品溶液注入色谱柱；

（2）根据分子尺寸不同，样品通过柱子时的洗脱时间会有所差异；

（3）使用标准分子量的蛋白质生成校准曲线，以估算未知样品的分子量。

（4）GFC方法适用于确定蛋白质的聚集状态和溶液中分子质量的分布，但对分子形态的依赖性较高。

2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）

PAGE是一种广泛应用的电泳技术，用于测定蛋白质分子量。常用的变性条件（如SDS-PAGE）能将蛋白质展开为线性结构。关键步骤包括：

（1）样品预处理以结合十二烷基硫酸钠（SDS），使其带有一致的负电荷；

（2）将样品加载至电泳胶；

（3）通过电场驱动，分子量小的蛋白质迁移更快；

（4）使用染料显色并对照标准蛋白标记进行分子量推算。

3. 质谱分析（MS）

质谱是蛋白质分子量的测定的现代核心技术。其高灵敏度和分辨率使其适用于单个分子和复杂混合物的分析。常用的步骤包括：

（1）样品通过电喷雾电离（ESI）或基质辅助激光解吸电离（MALDI）生成带电分子；

（2）带电分子通过质量分析器，根据质荷比（m/z）分离；

（3）数据分析阶段，通过离子峰计算分子量，甚至可以检测到翻译后修饰（如糖基化或磷酸化）。

4. 沉降分析

超速离心沉降分析通过测定蛋白质在溶液中沉降速率或平衡，推算其分子量。该方法无需化学修饰，对样品结构保持良好，但实验周期较长。

三、应用与优势

蛋白质分子量的测定在蛋白质研究和相关技术开发中应用广泛。例如，通过精确测定分子量，可以明确重组蛋白的表达情况，验证药物蛋白的纯度，或检测蛋白质的翻译后修饰和聚集状态。

针对不同的实验需求，研究者通常结合使用多种测定方法，以获得更全面的结果和更高的精确度。这项测定不仅是基础研究的重要组成部分，同时也在生物药物质量控制和功能性验证中发挥关键作用。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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